ⅠNukleinska kislinaiuvod
Nukleinsko kislino delimo na deoksiribonukleinsko kislino (DNA) in ribonukleinsko kislino (RNA), med katerimi je RNA razdeljena na ribosomsko RNA (rRNA), sporočilno RNA (mRNA) in prenosno RNA (tRNA) glede na njene različne funkcije.DNA je v glavnem koncentrirana v jedru, mitohondrijih in kloroformu, medtem ko je RNA v glavnem porazdeljena v citoplazmi.Kot materialna osnova izražanja genov ima ekstrakcija nukleinske kisline izjemno pomembno vlogo v raziskavah molekularne biologije in klinični molekularni diagnostiki.Koncentracija in čistost ekstrakcije nukleinske kisline bo neposredno vplivala na poznejši PCR, sekvenciranje, vektorsko konstrukcijo, encimsko razgradnjo in druge poskuse.
Ⅱ Metoda ekstrakcije in čiščenja nukleinske kisline
① Metoda ekstrakcije fenola/kloroforma
Ekstrakcija s fenolom/kloroformom je klasična metoda za ekstrakcijo DNK, ki za obdelavo vzorcev uporablja predvsem dve različni organski topili, raztapljanje nukleinske kisline na osnovi DNK v vodni fazi, lipide v organski fazi in proteine med obema fazama.Ta metoda ima prednosti nizkih stroškov, visoke čistosti in dobrega učinka.Slabosti so zapleteno delovanje in dolg čas.
② Metoda Trizol
Trizol metoda je klasična metoda za ekstrakcijo RNA.Metoda Trizol je po centrifugiranju s kloroformom razdeljena na vodno fazo in organsko fazo, pri kateri se RNA raztopi v vodni fazi, vodna faza se prenese v novo EP epruveto, po dodatku izopropanola dobimo oborino in nato čiščenje z etanolom.Ta metoda je primerna za ekstrakcijo RNA iz živalskih tkiv, celic in bakterij.
③ Metoda čiščenja s centrifugalno kolono
Metoda čiščenja s centrifugalno kolono lahko adsorbira DNA posebej s posebnimi materiali za adsorpcijo silicijeve matrice, medtem ko lahko RNA in beljakovine nemoteno prehajajo, nato pa uporabijo visoko sol z nizkim PH za kombiniranje nukleinske kisline, nizko soljo z visoko vrednostjo PH elucije za ločevanje in čiščenje nukleinske kisline.Prednosti so visoka koncentracija čiščenja, visoka stabilnost, ni potrebe po organskem topilu in nizki stroški.Pomanjkljivost je, da ga je treba centrifugirati korak za korakom, več operacijskih korakov.
④ Metoda magnetnih kroglic
Metoda magnetnih kroglic je razdelitev vzorca celičnega tkiva skozi lizat, sprostitev nukleinske kisline v vzorcu, nato pa se molekule nukleinske kisline specifično adsorbirajo na površini magnetne kroglice, medtem ko nečistoče, kot so beljakovine in sladkorji, ostanejo v tekočina.Skozi korake cepitve celičnega tkiva, vezave magnetnih kroglic z nukleinsko kislino, izpiranja nukleinske kisline, elucije nukleinske kisline itd. se končno pridobi čista nukleinska kislina.Prednosti so preprosto upravljanje in kratek čas uporabe, brez potrebe po stopenjskem centrifugiranju.Ima nizke tehnične zahteve in lahko realizira samodejno in masovno delovanje.Posebna kombinacija magnetnih kroglic in nukleinske kisline naredi ekstrahirano nukleinsko kislino z visoko koncentracijo in čistostjo.Pomanjkljivost je, da je trenutna tržna cena relativno draga.
⑤ Druge metode
Poleg zgornjih štirih metod obstajajo krekiranje pri vrenju, metoda koncentrirane soli, metoda anionskega detergenta, ultrazvočna metoda in encimska metoda itd.
Ⅲ Vrsta ekstrakcije nukleinske kisline
Foregene ima vodilno svetovno platformo Direct PCR, platformo za izolacijo RNK z dvema stolpcema (samo DNK + samo RNK).Glavni proizvodi vključujejo komplete za izolacijo DNA/RNA, reagente za PCR in Direct PCR, serije reagentov za molekularni laboratorij.
① Totalna ekstrakcija RNK
Vzorci ekstrakcije celotne RNA vključujejo kri, celice, živalska tkiva, rastline, viruse itd. Visoko čistost in visoko koncentracijo celotne RNA je mogoče pridobiti z ekstrakcijo celotne RNA, ki se lahko uporablja v RT-PCR, analizi čipov, in vitro prevodu, molekularno kloniranje, Dot Blot in drugi poskusi.
Povezano s ForegeneKompleti za izolacijo RNK
Komplet za izolacijo celotne živalske RNA--Hitro in učinkovito ekstrahirajte visoko čisto in kakovostno skupno RNK iz različnih živalskih tkiv.
Cell Total RNA Isolation Kit--Visoko prečiščeno in visokokakovostno celotno RNK je mogoče pridobiti iz različnih gojenih celic v 11 minutah.
Komplet za izolacijo celotne rastlinske RNK--Hitro ekstrahirajte visokokakovostno skupno RNK iz rastlinskih vzorcev z nizko vsebnostjo polisaharidov in polifenolov.
Komplet za izolacijo virusne RNA--Hitro izolirajte in očistite virusno RNA iz vzorcev, kot so plazma, serum, telesne tekočine brez celic in supernatanti celične kulture.
② Ekstrakcija genomske DNK
Vzorci ekstrakcije genomske DNK vključujejo zemljo, iztrebke, kri, celice, živalska tkiva, rastline, viruse itd. Ekstrakcijo genomske DNK lahko uporabimo pri encimski razgradnji, gradnji knjižnice DNK, PCR, pripravi protiteles, Western blot hibridizacijski analizi, genskem čipu, visoki - zaporedje pretoka in drugi poskusi.
Povezano s ForegeneKompleti za izolacijo DNK
Komplet za izolacijo DNK živalskega tkiva--Hitra ekstrakcija in čiščenje genomske DNK iz več virov, kot so živalska tkiva, celice itd.
Blood DNA Midi Kit (1-5 ml)--Hitro očistite visokokakovostno genomsko DNK iz antikoagulirane krvi (1-5 ml).
Komplet za izolacijo DNK bukalnih brisov/FTA kartice--Hitro očistite visokokakovostno genomsko DNK iz vzorcev bukalnih brisov/FTA kartice.
Komplet za izolacijo rastlinske DNK--Hitro prečistite in pridobite visokokakovostno genomsko DNK iz rastlinskih vzorcev (vključno s polisaharidi in rastlinskimi vzorci polifenolov)
③ Ekstrakcija plazmida
Plazmid je nekakšna krožna majhna molekula DNA v celicah, ki je običajen nosilec za rekombinacijo DNA.Metoda ekstrakcije plazmida je odstranitev RNA, ločevanje plazmida od bakterijske genomske DNA ter odstranitev beljakovin in drugih nečistoč, da dobimo relativno čist plazmid.
Splošni plazmidni mini komplet--Hitro očistite visokokakovostno plazmidno DNA iz transformiranih bakterij za rutinske poskuse molekularne biologije, kot sta transformacija in encimska razgradnja
④ Druge vrste ekstrakcije, ekstrakcija miRNA itd.
Komplet za izolacijo miRNA živali--Hitro in učinkovito ekstrahirajte majhne fragmente RNA 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA iz različnih živalskih tkiv in celic
Ⅳ Zahteve za ekstrakcijo nukleinske kisline in rezultat čiščenjas
① Za zagotovitev celovitosti primarne strukture nukleinske kisline.
② Zmanjšajte motnje beljakovin, sladkorjev, lipidov in drugih makromolekul
③ V vzorcih nukleinskih kislin ne sme biti organskih topil ali visokih koncentracij kovinskih ionov, ki lahko zavirajo encim.
④ Pri ekstrakciji DNK je treba odstraniti kontaminacijo z RNA in drugo nukleinsko kislino in obratno.
Čas objave: 24. nov. 2022
